نحوه کار با دستگاه Elecsys 2010

راهنمای استفاده ازدستگاه ایمنوانالایزر

قبل ازروشن کردن دستگاه بایدنکات زیرچک گردد:

1- محلولهای clean cell; pro cell

2- خالی کردن ظرف wasteمحلول

3- روشن کردن کلیداصلی وکلیدoperation

بعد ازبالاامدن سیستم مراحل زیربایدانجام شود:

1- خالی کردن ظرف solid wast مربوط به tipهاوcupها

البته این کاردرهنگام stand byبودن دستگاه صورت پذیردتاعددمربوطه صفرگردد.

2- واردصفحه stayus شده وopen requestکرده وبعد دکمه deleteرابرای خالی کردن sample diskفشار دهید(این کاربرای تمامی sample diskهای 0تا9قراردهید)

3-محلولهاراازیخچال بیرون اورده وروی reagent diskقرارداده (درب محلولها حتما بایدشل گردد—برای اطمینان diluent universalقرارداده شود(درpositionهای 16و17و18)

4-واردصفحهس inventoryشده وعمل reagent scanراانجام دهید.

بایدبه رنگ نوشته های روی تست های ظاهرشده روی صفحه inventoryتوجه کنیدودرصورت نیازاگر لازم باشدتاتستی کالیبره گردداین کار راانجام دهید.

Inventory checks

T reagent pack threshold reached

X reagent pack is expired

E reagent pack is empty

N corresponding pretreatment reagent pack is missing everything is ok valid calibration exists

R c lot calib for this test necessary

R new reagent pack with no lot calib available

M a control was manually requested for this reagent pack

C calibration for this assay was manually requested

Cm calibration and control for this assay were manually requested

اگرتست یاتست هایی نیاز به کالیبره کردن داشته باشند بایدمراحل زیر انجام شود

1-واردصفحه utilityمی شوید

2-واردصفحه calibration dataمی شوید

3-برای کالیبره کردن تست جدیدکارت های کالیبراتوررادرمحل مخصوص ان قرار دهیدوعمل bc card scan راانجام دهید(صبرمی کنیدتادسنگاه به حالت stand by دربیایدوسپس کارت راخارج کنید)

Age	low risk	Moderate risk	High risk
2-19		171-185	>185 [4.8]
20-29		201-220	>220 [5.7 ]
30-39		221-240	>240 [6.2]
>40		241-260	>260 [6.8]

 

سلیاک یک بیماری خود ایمنی می باشد که در نتیجه تولید آنتی بادی بر علیه بعضی از قسمت های روده ایجاد می شود و در نهایت باید کاهش جذب، اسهال، دل دردهای شکمی، نفخ، کاهش وزن و کم خونی می شود. گلوتن ترکیبی از پروتئین های مختلف در گندم، جو و دیگر غلات می باشد و حساسیت به آن باعث بروز علائم بالینی می گردد.

گلیادین: پس از جذب در روده توسط TTG (ترانس گلوتامیناز بافتی) متابولیزه می شود. در این بیماری ریشه های گلوتامین با ریشه های گلوتامیک اسید جایگزین می شود. از نظر استعداد ژنتیکی پیوستگی با HLA-DQ2 و HLADQ8 یک فاکتور مهم می باشد. به طوری که در صورت منفی بودن HLA-DQ2 و HLADQ8 تقریبا بیماری رد می شود. در افراد بیمار قطعات گلیادین تغییر یافت (گلوتن دآمینه)توسط سلول های عرضه کننده آنتی ژن HLADQ2/8 به سلول های T عرضه شده و یک واکنش ایمنی وسیع ایجاد شده که باعث آسیب گسترده به روده باریک و اعمال طبیعی آن می شود این آنتی بادی معمولا بر علیه A.TTG ترانسگلوتامیناز بافتی EMA اندومزیال آنتی بادی و قطعات تغییریافته گلیادین می باشد.

حدود 10 درصد افراد با بیماری سلیاک مبتلا به بیماری پوستی تاولی به نام HD درماهیت هرپتی فرم می شوند.

سلیاک به عنوان یکی از عوامل سقط جنین مکرر در سه ماهه اول بارداری شناخته شده است و مسئول 5 درصد از آنها می باشند.

این بیماری علاوه بر HD همراهی های کمتری نیز با دیابت بیماری خودایمنی تیروئیدها دارد و در طولانی مدت فرد مستعد ملانوم پوستی و لنفوم روده می گردد.

در حدود 5-2 درصد بیماران ممکن است کمبود IgA داشته باشند.

تشخیص: اندازه گیری آنتی بادی IgG و IgA برضدTTG و یا ضد گلیادین پیشنهاد می شود و تایید بیماری با بیوپسی روده کوچک میسر می باشد. اندازه گیری A.TTG و A.GliAdin حساسیت و اختصاصیت خیلی بالایی برای تشخیص CD دارد. تغییرات میزان آنتی بادی در خون نسبت مستقیم با علائم بالینی و تخریب مخاط روده باریک دارد و در اوایل بیماری غلظت آنتی بادی کم است و در صورت منفی شدن باید بعد از چند وقت دیگر آزمایش تکرار گردد، زیرا غلظت آنتی بادی ها در صورت کاهش دریافت گلوتن از رژیم غذایی نیز به سرعت کاهش می یابند و بعد از 6 تا 12 ماه بعد از درمان کاهش آنتی بادی محسوس خواهد بود مثبت بودن A.TTG به معنای بیماری می باشد. برای تشخیص بیماری از تست های زیر می توان استفاده کرد.

1- Anti TTG IgA

2- Anti TTG IgG

3- EMA IgG

4- Anti Gliadin IgG 

5- Anti Gliadin IgA                                                                                                             

WWW.MAKTAB1395.BELOGFA.COM 
نگارنده: شهرام شجاعی                                                                                                                   

آزمایش Anti-Liver Kidney Microsomal Antibodies

آزمایش Anti-Liver Kidney Microsomal Antibodies

 هپاتیت اتوایمیون(Autoimmune hepatitis) از زمره بیماری های کبدی می با شد که بعلت اختلال در عمل سیستم ایمنی ایجاد خواهد شد.  هپاتیت اتوایمیون سه تیپ دارد که تیپ یک شایع ترین فرم هپاتیت اتوایمیون بوده و در خانم های  جوان دیده می شود، تیپ دو در بیماران با هپاتیت C مزمن و تیپ سه که نادر ترین فرم هپاتیت اتوایمیون است مانند تیپ یک در زنان جوان دیده می شود. در موارد تشخیص سریع و بموقع هپاتیت اتوایمیون خیلی خوب قابل کنترل و نیز درمان می باشد اما در صورت به تعویق افتادن تشخیص پیش آگهی هپاتیت اتوایمیون مناسب نخواهد بود. به علاوه افتراق هپاتیت اتوایمیون از هپاتیت های ویروسی با اهمیت می باشد زیرا درمان در آنها متفاوت می با شد. از تغییراتی که در هپاتیت اتوایمیون شاهد آن خواهیم بود شامل افزایش گاماگلوبولینها و نیز افزایش اتوآنتی‌بادی‌ها که در هپاتیتهای ویروسی آنتی بادی های اتوایمیون وجود ندارد. از اتو آنتی بادی ها می توان به آنتی بادی های Anti Nuclear Ab(ANA), Smooth Muscle Ab(SMA),Liver Kidney microsomal Ab (LKM), Soluble Liver Ag(SLA),  اشاره نمود. از بین این آنتی بادی هاANA/SMA  در سایر بیماریهای اتوایمیون و همچنین درصد کمی از هپاتیت های ویروسی دیده می شود پس تست اختصاصی برای بررسی هپاتیت اتوایمیون نمی باشد. مارکر SMA یک مارکر مهم در AIH  تیپ یک است. در بیماران با آزمایش ANA/SMA مثبت بررسی LKM بسیار ارزشمند است.

پروتئینLKM  این آنتی ژن  بر سه تیپ می باشد که شامل:LKM-1  این مارکر در ارتباط با سیتوکروم اکسیدازP4502D6  می باشد، یک پروتئین پنجاه کیلو دالتونی که در سیتوپلاسم اکثر سلول های کبدی و توبول های کلیوی ***مال وجود دارد. مارکر LKM بیشتر در کودکان  و بویژه در دختران 14-2 سال ارزش تشخیصی دارد اما تنها در 4 درصد بالغین با بیماری هپاتیت اتوایمیون مشاهده می شود. مارکرLKM-2  مرتبط با سیتوکروم اکسیداز P4502C9 است که در متابولیسم داروها اهمیت بسزایی دارد. مارکر LKM-3 در هپاتیت مزمن نوع D مشاهده می شود. به علاوه مارکر LKM در بعضی از بیماران با هپاتیت C  نیز مثبت می شود. پس، این آنتی‌بادی هم اختصاصی هپاتیت اتوایمیون نخواهد بود.

مارکر SLA: این آنتی ژن محلول کبدی اختصاصیترین آزمایش جهت بررسی هپاتیت اتوایمیون است و اختصاصیت آن حدود 100درصد برای هپاتیت اتوایمیون می باشد اما تنها در 15-10درصد بیماران هپاتیت اتوایمیون مثبت می شود.

 آزمایش  اندازه گیری اتوآنتی بادیهای ذکر شده در اکثر موارد بوسیله روش الایزا انجام می شود. در روش الایزا آنتی ژنی که به دنبال آنتی بادی علیه آن در سرم بیمار هستیم  در کف گوده ها  کوت شده که به این گوده ها سرم بیمار را که بر اساس دستورالعمل داده شده در کیت رقیق شده است (اغلب 1 به 110)اضافه می گردد ودر مرحله بعدی با اضافه کردن Ati-Human Ab کنژوگه با پراکسیداز و سوبسترای آن که TMB تترا متیل بنزیدین است کمپلکس های ایمنی ایجاد شده بر اساس رنگ بررسی می شود. شدت رنگ ایجاد شده متناسب با میزان و غلظت اتوآنتی بادی ها می باشد.

 

قسمت عمده آهن بدن درهموگلوبین گلبول های قرمز وجود داشته (نزدیک به دو سوم)و  باقیمانده، آهن ذخیره ای به شکل فریتین و هموسیدرین است (نزدیک به یک سوم). بیماری های مربوط به هموستاز آهن از جمله شایع ترین بیماری های انسان می باشند. فقر آهن ممکن است به علت جذب ناکافی (مثلا در بیماری سلیاک،بیماری التهابی روده، برداشتن روده، علل تغذیه ای)یا از دست رفتن زیادی آهن(مثلا در بیماری التهابی روده، واریس مری، گاستریت، زخم، عفونت های انگلی و سایر اختلالات دستگاه گوارش)باشد.
بیماری های مربوط به بار زیادی (overload)آهن شامل دو گروه اصلی است. درگروه اول اریتروپوئز طبیعی بوده ولی آهن بیشتر از ظرفیت اتصالی آهن به ترانسفرین می باشد(مثل هموکروماتوز)، درنتیجه آهن در سلول های پارانشیمی کبد و سایر ارگان ها رسوب می کند. در گروه دوم کاتوبولیسم گلبول های قرمز سبب overload آهن شده (مثل overload ناشی از ترانسفوزین)که آهن در ماکروفاژهای سیستم رتیکولواندوتلیال رسوب می کند.

ترانسفرین پروتئینی است از گروه گلوبولین‌ها با وزن 80kD که در خون نقش حمل آهن را بر عهده دارد. ترانسفرین در کبد بشکل پروتئین غیرفعال آپوترانسفرین ساخته می‌شود. در هنگام اتصال با یون‌های فریک به شکل فعال ترانسفرین مبدل می‌گردد. ترانسفرین یون‌های فریک را از پروتئین فریتین دریافت نموده و به بافت‌های خون ساز منتقل می‌کند تا آهن موجود در آن در ساخت هموگلوبین بکار رود. هر مولکول ترانسفرین قابلت اتصال به دو یون فریک را دارد. یون‌های فریک متصل به پروتئین‌های ترانسفرین حدود 1/0 درصد از مجموع آهن موجود در بدن را شامل می‌شود.

در حقیقت TIBC  یک تقریبی از ترانسفرین است.    100× (سطح آهن سرم)/TIBC =  اشباع ترانسفرین(%)
با مقدار ترانسفرین، TIBC  قابل محاسبه خواهد بود:    TIBC(µg/dl)   =  Transferrin(mg/dl)x  1.25

آنالیز ادرار

برای هر آزمایش ادرار از نظر استاندارد نیاز به 10 سی سی ادرار نیاز می باشد. نمونه ها را جمع آوری کرده و به ترتیب شماره قبض در زیر هود مرتب می کنیم. 

ادرار را در لوله های ادرار ریخته و نوار ادرار را داخل آن قرارذ می دهیم. مدت زمان گذاشتن نوار و خواندن اندکس ها باید کوتاه باشد. هر کدام از اندکس ها موجود در نوار نشان دهنده یک پارامتر خاص می باشد. 

وزن مخصوص یا Ph , SGو Blood, قند، اوروبیلینوژن، بیلی روبین، کتون، پروتیین، نیتریت (گاها برخی از نوارها اندکس مربوط به لکوسیت را نیز دارند). سپس نمونه ها در سانتریفیوژ گذاشته و زیر میکروسکوپ مشاهده می کنیم. گزارش پارامترها از Trace تا +++ می باشد. در ادامه به هر یک از این پارامترها می پردازیم. 

رنگ:  رنگ ادرار یکی از اجزای اصلی آنالیز ادرار است که بسته به شرایط مختلف بدن تغییر می کند. حالت طبیعی ان زرد کم رنگ یا پر رنگ است. مصرف برخی مواد خوراکی، دارو، دیابت، تعریق زیاد و عفونت های ادراری می تواند باعث تغییر رنگ ادرار شود. 

وزن مخصوص ادرار یا SG: از دستگاه رفراکتومتر برای خواندن وزن دقیق ادرار استفاده می شود. وزن مخصوص ادرار حاصل اندازه گیری اجزای مختلف ادرار شامل مواد دفعی و املاح است. غلیظ شدن ادرار و کمبود مایع در بدن، تب، اسهال و استفراغ، عفونت وزن مخصوص ادرار را افزایش می دهند. (وجود لکوسیت و پروتئین باعث افزایش وزن مخصوص می شود). 

گلوکز: قندی است که در خون وجود دارد و غذای سلول می باشد. بطور طبیعی مقادیر اندکی گلوکز در ادرار وجود دارد اما در شرایط عادی ادرار عاری از گلوکز در نظر می گیرند. تغذیه وریدی، دیابت کنترل نشده، آسیب های کبدی، کلیوی و مغزی و برخی مسمومیت ها باعث ورود مقادیر زیادی گلوکز به ادرار می شود. (در صورت تغییر رنگ دادن گلوز روی نوار ادرار از نوار قند مجزا استفاده می شود)

کتون: وقتی چربی دربدن شکسته می شود ودر مسیر متابولیسم مصرف می شود کتون به وجود می آید که بطور طبیعی نباید در ادرار ترشح می شود. حضور آن ها نشان دهنده این است که بدن به جای گلوکز از چربی استفاده می کند.

کریستال: در حالت طبیعی کم و یا اصلا وجود ندارند. اما در برخی موارد مثل سنگ کلیهف عفونت ادراری و مصرف برخی داروها باعث رسوب املاح و تشکیل کریستال می شود. کریستال ها در واقع مقدمه ایی برای تشکیل سنگ کلیه هستند. (اگزالات کلسیم و اسد اوریک). نوع کریستال با توجه به نوع بیماری و pH ادرار متفاوت است. کریستال های اورات آمورف در زمانیکه Ph ادرار اسیدی است دیده می شود و کریستال های فسفات آمورف دز زمانیکه ادرار قلیایی است دیده می شود.

Cast های ادراری: یک انعقاد پروتئینی در توبول های کلیوی است که محتویات توبول ها را در بر می گیرد. 

کست های هیالین: فاقد هر گونه المان داخلش است و تماما از پروتئین تام هاسفال تشکیل شده و پس از ورزش، در معرض گرما قرار گرفتن، پیلونفریت یا بیماری های مزمن کلیوی دیده می شود. 

کست RBC: حاوی RBC است و تشکیل هماچوری گلومرولی را مسجل می کند.

کست WBC: در گلومرونفریت و پیلونفریت دیده می شود.

کست های گرانولار و Waxy: ناشی از دژنرسانس المان سلولی ایجاد می شود(عامل بیماری توبولی)

کست Fatty: در هایپو تیروئیدیسم، سندروم نفروتیک دیده می شود.

- WBC و RBC در اثر بیماری های مختلف مانند عفونت ادراری، آسیب مجاری ادراری، سنگ کلیه در ادرار افزایش می یابد. 

- معرف اوروبیلینوژن و بیلیروبین به ترتیب ارلیخ و لوگول است. 

- از معرف اسید سالیسیلیک 3% برای حضور پروتئین در ادرار استفاده می شود و کدورت مشاهده شده را یادداشت می کنیم. 

کشت ادرار u/c:

از لوپ کالیبره یا یکبار مصرف برای کشت ادرار استفاده می شود. محیط های رایج از جمله EMB و  Blood Agar برای کشت استفاده می شود. کشت را ابتدا روی محیط Blood , و سپس روی محیط EMB می بریم. (ائوزیب بلوی موجود در محیط EMB مانع از رشد باکتری های گرم مثبت می شود). سپس در انکوباتور 37 درجه سانتی گراد قرار می دهیم. 

در صورت مثبت بودن کشت 24 ساعت از گالری (محیط های افتراقی)و محیط های اختصاصی برای تشخیص سویه باکتری استفاده می کنیم. 

معرفی دستگاه هیتاچی 717

دستگاه هیتاچی 717 یک اتوانالایزربیوشیمی است که قابلیت برنامه ریزی برای انجام تست های روتین بیوشیمی خون، ادرار و اندازه گیری انزیم ها ایزو انزیم ها مارکرهای قلبی لیپو پروتین ها اپولیپوپروتین ها و تعیین سطح دارویی و. را داراست

دستگاه هیتاچی 717 مجهز به سیستم خنک کننده ریجنت ها (یخچال)در دو سینی ریجنت بوده و دارای سیستم شستشوی خودکار می باشد.

ابن دستگاه با داشتن 120 کووت قادر به انجام 400 تست در ساعت است.

دستگاه هیتاچی 717 از نظر قابلیت برنامه ریزی Programing به صورت باز Open می باشد. یعنی نصب کیت های بیوشیمی بر روی این دستگاه منحصر به کمپانی سازنده نمی باشد.بلکه هر مرکز درانتخاب کیت وتعریف پارامترهای مربوطه با توجه به کیت  مورد نظر آزاد می باشد.

اتو انالایزر 717 ازنظر سیستم خوانش Reading به صورت بیمار به بیمار Random access می باشد.

عدم دقت دستگاه

برای بدست آوردن عدم دقت دستگاه 3 نمونه انتخاب می کنیم (مقادیر LOW، NORMAL، HIGH)انتخاب کرده و هر کدام را 10 بار به دستگاه می دهیم. سپس ضریب تغییرات را برای هر نمونه بدست آورده و از 3 تای آنها میانگین می گیریم. CV بدست آمده باید کمتر یا مساوی مقادیر ادعا شده در کاتالوگ دستگاه باشد.

این بررسی به دوشکل انجام پذیر است. درصورت استفاده از خون کنترل،می توان با استفاده از نتایج نمونهکنترل که طی روزهای متوالی با دستگاه آزمایش شده،عدم دقت هر پارامتر را محاسبه کرد و در صورت دسترسی نداشتن به خون کنترل، باید از نمونه های روزانه برای این امر استفاده کرد. به این ترتیب، هر ماه دو نمونه یا بیشتر را حداقل 10 بار به صورت متوالی بادستگاه آزمایش کرده و از نتایج به دست آمده، عدم دقت هر پارامتر رامحاسبه کرد. توصیه می شود که عدم دقت دستگاه به ویژه هنگام نصب و راه اندازی، با استفاده از نمونه هایی بادامنه های طبیعی و غیرطبیعی بررسی شود. برای تهیه نمونه غیرطبیعی پایین، می توان از نمونه رقیق شده استفاده کرد، به این ترتیب که پلاسمای نمونه را جدا کرده و سپس حجمی از نمونه را با این پلاسمای به دست آمده مخلوط کرد. نمونه خون با دامنه غیرطبیعی بالا را نیز می توان با غلیظ کردن نمونه تهیه نمود. برای اینکار باید ظرف نمونه را به مدت 2 ساعت با زاویه 45 درجه نگهداری کرد و سپس با برداشتن نیمی از پلاسمای ایجاد شده و مخلوط کردن کامل، از آن به عنوان نمونه غیرطبیعی بالا استفاده نمود. در صورت مطابقت نداشتن عدم دقت هر پارامتر با ادعای سازنده که در بروشور درج شده است، ضروری است با شرکت پشتیبان تماس گرفته شود.

اگر فقط برای یکی از نمونه ها این روش را اجرا کنیم.عدم دقت را در همان سطح کنترلی (LOW، NORMAL، HIGH)انجام داده ایم.                                            http://www.maktab1395.blogfa.com

هر روز پیش از شروع آزمایش، شمارش زمینه دستگاه 2 انجام شده و در صورت امکان سوابق آن نگهداری شود. به طور معمول، مقادیرمربوط به شمارش زمینه هر دستگاه در دستورالعمل آن ارائه شده است. سازمان جهانی بهداشت نیز در این رابطه معیارهایی ارائه نموده است که در زیر به آنها اشاره  می شود:

                                                                                                                                                          

 

در صورت زیاد بودن تعداد نمونه های مورد آزمایش در هر سری کاری، بهتر است در فواصل آزمایشها دستور شست و شوی دستگاه و بررسی شمارش زمینه مجدداً اجرا شود. برای اطمینان از صحت مرحله انجام آزمایش، آشنایی کامل کاربر با اصول کار با دستگاه، اجرای برنامه های کالیبراسیون و کنترل کیفیت و رفع خطاها الزامی است.                             www.maktab1395.blogfa.com